液相色譜柱注意事項(xiàng)和維護(hù) 液相色譜柱活化方法
液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團(tuán)的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(tuán)（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。本文重點(diǎn)介紹液相色譜柱的注意事項(xiàng)、維護(hù)、活化方法：
色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是最佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
一、液相色譜柱的維護(hù)分為： 色譜柱的平衡、色譜柱的再生、最后才是色譜柱的維護(hù)。下面詳解：
1. 色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。 每天用足夠的時(shí)間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的"補(bǔ)償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟：
a. 平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時(shí)間來平衡）
b. 如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡； 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
2. 色譜柱的再生
長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）?？梢詫ιV柱進(jìn)行再生，在有條件的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵進(jìn)行柱子的再生。
色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積
125-4mm 1.6ml 30ml
250-4 mm 3.2ml 60ml
250-10mm 20ml 400ml
選擇再生方法：
極性固定相（如Si，NH2* ，DIOL基色譜填料）的再生：
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非極性固定相（如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水
注意：
a. 在對NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機(jī)溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
3. 色譜柱的維護(hù)
a.使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）
b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍
c.避免流動相組成及極性的劇烈變化
d.流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理
e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中
f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
二、液相色譜柱的使用注意事項(xiàng)
(1)液相色譜柱色譜柱使用前注意事項(xiàng)：
液相色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價(jià)報(bào)告所示的流動相。在使用前，一定要注意液相色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10%左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。
(2)流動相：
流動相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過0.45μm 的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0-8.0。當(dāng)必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并完全置換掉原來所使用的流動相。
(3)樣品：
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（spe）對樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
(1)反相液相色譜柱色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：
使用緩沖液或含鹽的流動相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。
(2)長期保存色譜柱：
如色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。
色譜柱在使用中最常見的問題：就是柱壓升高，如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢增加，屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點(diǎn)：
(1)色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
(2)色譜柱頭的填料被樣品污染；
(3)色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑，形成結(jié)晶析出；
(4)流動相pH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。
解決辦法如下：
(1)如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘，后再用純水超聲10分鐘，重新裝入色譜柱。
(2)如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內(nèi)前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細(xì)修復(fù)后，重新安裝上柱頭螺絲。
(3)如確定定是鹽結(jié)晶，用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
(4)如果因pH值使用不當(dāng)，很難恢復(fù)。
三、液相色譜柱活化方法、新液相色譜柱活化多久？新液相色譜柱使用前還要活化么？
新買的液相色譜柱需要活化，活化的方法因柱子而異，普通反相C18柱的話我是這樣活化的：0.5ml/min流速的甲醇沖洗2小時(shí)以上。液相的新色譜柱都是保存在一定的保存液中的，所謂的活化就是替換掉其中的保存液，沖洗掉柱中可能殘留的其他雜質(zhì)，以免影響后續(xù)分析工作。
不同的色譜柱活化的方法不盡相同，要根據(jù)柱子的種類來選擇活化方法。另外，要提醒的是，柱子活化時(shí)不要接檢測器，避免不必要的污染。
其它問答，新買氣相色譜柱活化時(shí)間多久合適？
急用的話，一兩個(gè)小時(shí)足矣。 一般都是晚上活化，不占用白天時(shí)間，一個(gè)晚上從低溫到高溫，再回到低溫，很慢地改變溫度走一遍就可以了。
液相色譜柱活化到底起到一個(gè)什么樣的作用？
1.排除有機(jī)相揮發(fā)所產(chǎn)生的起泡。
2.柱子一般是鍵合了c18的，用甲醇沖柱子就是使得這些集團(tuán)達(dá)到更好的排列，有利于我們做樣。就像剛買的電池。
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